崇禎年間進士。授西安府推官。歷任戶部員外郎，郎中。崇禎八年（1639年），隨盧象升鎮壓各地農民起義。十年，被張國維推薦升任都御史，巡撫安慶，廬州，太平，池州及河南江西湖廣部分府縣。崇禎十四年總督漕運，崇禎十六年七月拜南京兵部尚書，參贊機務。崇禎十七年三月李自成攻占北京，弘光政權建立后，拜禮部尚書兼東閣大學士，時稱“史閣部”。時議設劉澤清、劉良佐、高杰、黃得功江北四鎮，以可法為兵部尚書，督師揚州。清兵入關后，曾主張與之議和，共討李自成的農民軍。后被馬士英等人排擠，于是督師淮揚，竭力協調江北四鎮將領，以抵御清兵。
順治二年四月，左良玉率數十萬兵力，由武漢舉兵東下，要清君側，“除馬阮”，馬士英竟詘史可法盡撤江防之兵以防左良玉，只得兼程入援，抵燕子磯，以致淮防空虛。左良玉為黃得功所敗，良玉嘔血死，全軍降清；史可法奉命北返，此時盱眙降清，泗州城陷。史可法遂至揚州，繼續抵抗清兵。順治二年（1645年）5月10日，清豫親王多鐸兵圍揚州，史可法傳檄諸鎮發兵援救，劉澤清北遁淮安，僅劉肇基等少數兵至，防守見絀。此時多爾袞勸降，史可法致《復多爾袞書》拒絕投降。副將史德威史可法追隨有年，可法收德威為義子，托以后事；二十四日清軍以紅衣炮攻城。入夜揚州城破，史可法自刎不死，眾人擁下城樓，大呼曰：“我史督師也?”，多鐸勸降，可法表示：“城亡與亡，我意已決，即碎尸萬段，甘之如飴，但揚城百萬生靈不可殺戮?”，后壯烈就義。多鐸因為攻城的清軍遭到很大傷亡，心里惱恨，下令屠殺揚州百姓。大屠殺延續了十天，死亡八十萬人，史稱“揚州十日”。史可法死后十二日，其遺體不知下落，隔年，史德威將其衣冠葬于揚州城天甯門外梅花嶺。后來全祖望曾寫《梅花嶺記》描述此事。
在圍城期間，多爾袞勸降，史可法寫就著名的《復多爾袞書》：“今逆賊未服天誅，諜知卷上西秦，方圖報復。此不獨本朝不共戴天之恨，抑亦貴國除惡未盡之憂。伏乞堅同仇之誼，全始終之德；合師進討，問罪秦中；共梟逆賊之頭，以泄敷天之憤。則貴國義聞，照耀千秋，本朝圖報，惟力是視�！辈槐安豢海鱾魅f世。另著有《史忠正公集》。
史可法是左光斗的學生，方苞曾寫《左忠毅公逸事》，述說史可法與其師左光斗之間的提攜情感，自是錚錚鐵骨、有血有淚。
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