高中生物實驗：過氧化氫酶活性的測定

原理

過氧化氫酶廣泛存在于植物的所有組織中，能將過氧化氫分解為氧和水，可使生物機體免受過氧化氫的毒害作用。測定過氧化氫酶的方法有測壓法、滴定法以及分光光度法等。用氧電極法測量放氧速度，方法靈敏而快速。放氧速度與過氧化氫酶活性成正比。

儀器藥品

氧電極儀 　　　　　　記錄儀

電磁攪拌器　　　　　 超級恒溫水浴

注射器、　　　　　　 微量注射器 　　　　容量瓶

反應杯　　　　　　　 亞硫酸鈉

過氧化氫酶

50mmol/L磷酸緩沖液，pH7.0(見附表2)。

50mmol/L過氧化氫溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸緩沖液定容至250ml即得。

標準過氧化氫酶溶液：稱取過氧化氫酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸緩沖液(pH7.0)11ml中，使酶濃度為10U/ml。

操作步驟

1.儀器的標定

按實驗88步驟進行儀器的標定，以求得記錄紙上每小格相當的含氧量。

2.繪制酶活性標準曲線

(1)在反應杯中放滿過氧化氫磷酸緩沖液，開啟電磁攪拌器攪動10分鐘，插入電極，吸去溢出在電極外面的溶液，調節移位旋鈕，使記錄筆位于滿刻度的10─20%左右，使記錄紙走動，1─2分鐘后溫度達到平衡，記錄筆畫出直線。

(2)用微量注射器從電極塞小孔中注入10μ110U/ml過氧化氫酶，立即記錄最初90秒鐘內的氧釋放曲線。

(3)根據上述同樣步驟，注入不同濃度的過氧化氫酶10μl(例如濃度為20、30、40、50U/ml等)，記錄氧釋放曲線。

(4)取放氧曲線的直線部分，根據其斜率及走紙速度，計算每分鐘氧的釋放量。

(5)以過氧化氫酶活性單位為橫坐標，每分鐘氧的釋放量為縱坐標，繪制標準曲線。

3.樣品測定

(1)在反應懷內注入50mmol/L過氧化氫磷酸緩沖液攪動10分鐘，插上電極，待記錄為一直線后，注入10μl合適濃度的待測酶液樣品，立即記下最初90秒鐘內的放氧曲線。

(2)根據樣品的放氧曲線，計算得到每分鐘的放氧量，在標準曲線上查得酶活性大小。

(3)如果沒有標準的過氧化氫酶，不能計算酶活性單位時，也可以用每分鐘的放氧量相對地表示酶的活性大小。

本文來自：逍遙右腦記憶 /gaozhong/132752.html

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