1、基因工程的概念：
| 基因工程的別名 | 基因拼接技術或DNA重組技術 |
| 操作環境 | 生物體外 |
| 操作對象 | 基因 |
| 操作水平 | DNA分子水平 |
| 基本過程 | 剪切→拼接→導入→表達 |
| 結果 | 人類需要的基因產物 |
（1）“分子手術刀”——限制性核酸內切酶（限制酶）
①來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。
②功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。
③結果：經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。
即當限制性內切酶作用于特定的DNA時，把這段序列沿著特定的切點切開的這個過程分兩種情況：
a、沿著中軸線切口（即沿著DNA雙鏈中對應的磷酸二酯鍵）切開，得到的就是兩個平末端；
b、在中軸線的兩端切口切開，得到的就是兩個黏性末端。例如：EcoRⅠ限制性內切酶就可以識別G/AATTC的DNA序列，然后在G和A間切開，得到的就是兩個黏性末端（之間可以根據堿基互補配對原則重組）限制酶的切口不都是一長一短的，一長一短的叫黏性末端，一樣長的叫平末端�！罢承阅┒恕痹诟咧薪滩闹幸沧鳌梆ば阅┒恕�。如圖：
（2）“分子縫合針”——DNA連接酶
| 種類 | E·coli-DNA連接酶 | T4-DNA連接酶 |
| 來源 | 大腸桿菌 | T4噬菌體 |
| 功能特性 | 只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來 | 縫合兩種末端，但連接平末端之間的效率較低 |
| 相同點 | 都縫合磷酸二酯鍵，如圖： | |
（3）“分子運輸車”——載體
①載體具備的條件：能在受體細胞中復制并穩定保存；具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入；具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。
②最常用的載體是質粒，它是一種裸露的、結構簡單的、獨立于細菌染色體之外，并具有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。
③其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒
知識點撥：
1、限制酶識別的序列的特點：呈現堿基互補對稱，無論是奇數個堿基還是偶數個堿基，都可以找到一條中心軸線，如圖，中軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向對稱重復排列的。如
以中心線為軸，兩側堿基互補對稱；
以
為軸，兩側堿基互補對稱。
2、獲取目的基因和切割載體時使用同種限制酶，目的是產生相同的黏性末端。
3、獲取一個目的基因需限制酶剪切兩次，共產生 4個黏性末端或平末端。
4、限制酶切割位點的選擇必須保證標記基因的完整性，以便于檢測。
本文來自：逍遙右腦記憶 /gaozhong/289778.html
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